熒光探針法PCR試劑盒是一種用于實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qPCR)的預(yù)混式檢測工具包。其核心原理是利用一種特異性寡核苷酸探針，該探針兩端分別標(biāo)記報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅基團(tuán)。當(dāng)PCR反應(yīng)發(fā)生時(shí)，Taq DNA聚合酶在延伸過程中會(huì)水解與模板結(jié)合的探針，導(dǎo)致報(bào)告基團(tuán)與淬滅基團(tuán)分離并產(chǎn)生熒光信號(hào)。該信號(hào)強(qiáng)度與擴(kuò)增產(chǎn)物的數(shù)量成正比，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)起始模板的精確定量。與染料法相比，探針法通過探針與模板的特異性結(jié)合，賦予了檢測特異性和準(zhǔn)確性，廣泛應(yīng)用于病原體檢測、基因分型、轉(zhuǎn)基因檢測等分子診斷與科研領(lǐng)域。
 

　　一、適用范圍
 

　　熒光探針法PCR試劑盒主要用于DNA分子的擴(kuò)增和檢測，適用于醫(yī)學(xué)、生物學(xué)、環(huán)保、食品安全等領(lǐng)域的基因檢測和研究。
 

　　二、試劑盒組分
 

　　本試劑盒包括：TaqDNAPolymerase、核酸引物混合液、熒光探針、混合實(shí)時(shí)PCRbuffer、雜交探針引物等多種成分。
 

　　三、試劑盒儲(chǔ)存條件
 

　　試劑盒應(yīng)存放于4℃環(huán)境中，不可凍結(jié)，避免光照和日曬。
 

　　四、操作步驟
 

　　1、從樣本中提取DNA并加入PCR反應(yīng)管；
 

　　2、加入試劑盒中的TaqDNAPolymerase，核酸引物混合液和熒光探針；
 

　　3、加入混合實(shí)時(shí)PCRbuffer并充分混合；
 

　　4、進(jìn)行PCR擴(kuò)增，并進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光檢測；
 

　　5、數(shù)據(jù)分析。
 

　　五、注意事項(xiàng)
 

　　1、試劑盒使用前應(yīng)充分搖勻；
 

　　2、反應(yīng)體系中不能有任何雜質(zhì)；
 

　　3、PCR擴(kuò)增過程中應(yīng)嚴(yán)格控制反應(yīng)溫度和時(shí)間，確保擴(kuò)增效果；
 

　　4、在檢測結(jié)果中，若目標(biāo)物對(duì)應(yīng)熒光探針的熒光值高于負(fù)對(duì)照熒光值，則可認(rèn)為該樣本中存在目標(biāo)物。
 

　　六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果的解釋
 

　　若PCR擴(kuò)增后，熒光信號(hào)強(qiáng)度大于背景噪聲，則說明目標(biāo)物存在，反之則說明不存在。根據(jù)樣品的熒光信號(hào)，可以通過計(jì)算閾值來判斷目標(biāo)物的數(shù)量。
 

　　七、質(zhì)量控制措施
 

　　為確保試劑盒質(zhì)量，本試劑盒的生產(chǎn)過程中進(jìn)行了多項(xiàng)質(zhì)量控制措施。例如在成分篩選、產(chǎn)品生產(chǎn)和包裝過程中不斷監(jiān)測，確保每一批次的產(chǎn)品品質(zhì)穩(wěn)定可靠。同時(shí)，每批產(chǎn)品在發(fā)貨前還會(huì)進(jìn)行校準(zhǔn)和功能測試，確保滿足客戶需求。
 

　　八、檢測限定及注意事項(xiàng)
 

　　為確保檢測準(zhǔn)確度，建議在每次檢測前使用模板對(duì)反應(yīng)體系進(jìn)行質(zhì)控。另外，在樣品處理、試劑配置、反應(yīng)條件控制等步驟中均需注意無菌操作，盡可能排除外源性污染。